標記細胞株要如何保存？

細胞株是用單細胞分離培養或通過(guò)篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間始終存在。原代培養物經(jīng)傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱(chēng)為有限細胞系，如可以連續培養，則稱(chēng)為連續細胞系，培養50代以上并無(wú)限培養下去。所以細胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標志的培養細胞。從培養代數來(lái)講，可培養到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間...

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細胞培養基介紹

細胞培養基的概念01細胞培養基是人工模擬細胞在體內生長(cháng)的營(yíng)養環(huán)境，并提供細胞營(yíng)養和促進(jìn)細胞生長(cháng)增殖的基礎物質(zhì)。細胞培養基是細胞培養的基礎，它為動(dòng)物細胞的健康快速成長(cháng)提供營(yíng)養物質(zhì)。所以，只要用到細胞進(jìn)行生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)制造，就勢必少不了細胞培養基。培養液或培養基，英文都是medium。當它是粉劑時(shí)，傾向性地稱(chēng)為培養基，而將粉劑配成液體后，多稱(chēng)為培養液。培養液中常需補加血清、抗生素等成分。細胞培養基的分類(lèi)02培養基主要有：天然細胞培養基、合成細胞培養基和無(wú)血清細胞培養基等。天然...

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C57小鼠皮膚成纖維細胞原代培養的方法

實(shí)驗方法1.將實(shí)驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養皿內剪碎，加入適量胰酶，轉移至15ml離心管內，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結束后，加入H-DMEM*培養基終止反應，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養皿內，加入2ml*...

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說(shuō)說(shuō)關(guān)于細胞外泌體研究的幾個(gè)重要問(wèn)題

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細胞培養上清以及各種體液中，細胞外泌體研究是近些年研究的熱點(diǎn)。細胞外泌體主要原理是根據外泌體的密度、粒徑、沉降系數和親和力等差異進(jìn)行分離，提取方法包括傳統的差速離心、密度梯度離心，以及后來(lái)發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細胞外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題：1、培養細胞...

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SD大鼠乳鼠心臟微血管內皮細胞原代分離培養方法

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開(kāi)胸，取出心臟后于含有雙抗的預冷過(guò)的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細胞培養皿內，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養箱內培養。4.4小時(shí)后去除培養皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養基，繼續培養。5.一般情況下48小時(shí)后可見(jiàn)...

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新生SD大鼠大腦皮層神經(jīng)元原代分離培養方法

一.實(shí)驗方法1.多聚賴(lài)氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養板的制備：原代分離進(jìn)行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴(lài)氨酸工作液，0.22μm濾膜過(guò)濾除菌，于超凈工作臺內吸取1ml加入六孔板內，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復使用2-3次），用無(wú)菌水清洗培養板，置于超凈臺內晾干，照紫外過(guò)夜。2.次日，取出生24h以?xún)鹊腟D大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...

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原代細胞分離培養都有哪幾種方法？

研究中常用的細胞系/株系是現成的，我們只需要進(jìn)行細胞傳代和種子保存。然而，這些細胞系往往因長(cháng)期體外培養而失去原有的生物學(xué)特性，對藥物治療的反應差距越來(lái)越大。因此，越來(lái)越多的人選擇原代細胞。來(lái)源于胚胎、組織、器官和外周血，經(jīng)特殊分離方法制備的原代培養細胞稱(chēng)為原代細胞。原代細胞培養，也稱(chēng)為原代培養，是從供體獲得的組織細胞在體外的培養。原代細胞是接近和最能反映體內生長(cháng)特性的細胞，適用于藥敏試驗、細胞分化等實(shí)驗研究。原代細胞分離培養都有哪幾種方法？1、組織培養法組織培養是一種常見(jiàn)、簡(jiǎn)...

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充質(zhì)干細胞涉及的研究竟然這么多

充質(zhì)干細胞是人體內一類(lèi)具有自我更新和多向分化潛能的原始細胞群。根據遺傳來(lái)源的分類(lèi)，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞。其中，胚胎干細胞具有發(fā)育全能性，是干細胞研究和應用中具吸引力的一種。然而，關(guān)于胚胎干細胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細胞相比，成體干細胞具有獲取方便、致瘤風(fēng)險低、無(wú)倫理爭議等優(yōu)點(diǎn)。因此，成體干細胞已成為干細胞臨床應用研究的主要對象。在成體干細胞的許多臨床研究中，充質(zhì)干細胞是最多的。間充質(zhì)干細胞是一種來(lái)源于中胚層的成體干細胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...

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