細胞株是用單細胞分離培養或通過(guò)篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間始終存在。原代培養物經(jīng)傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系所組成。如果不能繼續傳代，或傳代次數有限，可稱(chēng)為有限細胞系，如可以連續培養，則稱(chēng)為連續細胞系，培養50代以上并無(wú)限培養下去。所以細胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標志的培養細胞。從培養代數來(lái)講，可培養到40-50代。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個(gè)培養期間始終存在。對于人類(lèi)腫瘤細胞，在體外培養半年以上，生長(cháng)穩定，并連續傳代的即可稱(chēng)為連續性株或系。
標記細胞株是在細胞系中穩轉特定的標簽（LUC、GFP、RFP等），此細胞株可以作為示蹤工具細胞，為細胞成像以及活體成像提供便利。細胞株要如何存儲？
1、紫外消毒30min后關(guān)閉紫外燈，開(kāi)啟超凈臺正常工作狀態(tài)，用酒精消毒操作者的雙手。
2、將所需的培養基，胰酶確保瓶身干凈后放于工作臺面內，點(diǎn)燃酒精燈，將培養基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭后，再將瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次，旋開(kāi)瓶蓋后再次分別消毒瓶口和瓶蓋，分別放于酒精燈的兩側。特別是將培養基瓶放于斜架上，瓶口對準酒精燈，且放在距離酒精燈zui近的位置，瓶蓋置于酒精燈的另一側。
3、將培養瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開(kāi)后分別再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次，蓋放于酒精燈右側后將培養瓶?jì)鹊呐囵B液懸空倒進(jìn)污缸，在酒精燈消毒2-3次瓶口，豎直放好。取1ml移液器快速移動(dòng)在酒精燈上消毒1-2次，然后再裝上槍頭吸取1.5ml胰酶液，懸空移入培養瓶?jì)取?/div>
4、將培養使胰酶浸沒(méi)整個(gè)瓶壁的細胞層，計時(shí)約40s，立馬豎起對著(zhù)燈光可觀(guān)察到細胞與細胞之間有針孔樣縫隙，并有1-2個(gè)細胞脫落，這時(shí)為胰酶消化的時(shí)機。若看到成片的細胞從瓶壁脫落為胰酶消化過(guò)度；若看不到針孔樣縫隙和細胞脫落，則需繼續消化，輕輕的迅速平放培養瓶使胰酶浸沒(méi)細胞層1s后迅速豎起對著(zhù)燈光觀(guān)察細胞情況，可反復幾次，直至出現針孔樣縫隙和1-2個(gè)細胞脫落的消化狀態(tài)，用移液器將胰酶吸凈。
5、吸取1ml細胞凍存液于培養瓶?jì)?，并用移液器吸取少量的培養基輕柔的反復沖洗培養瓶壁5-8次，使貼壁細胞*脫落于培養基內再輕輕吹打2-3次，使細胞盡可能處于單個(gè)懸浮狀態(tài)。
6、將1ml含有標記細胞株的凍存液移入新的保種管內，擰緊瓶蓋，做好實(shí)驗標記。
7、將培養基瓶口和瓶蓋消毒2-3次后擰緊，熄滅酒精燈，整理實(shí)驗臺面，取出實(shí)驗試劑及污缸等，關(guān)閉超凈工作臺。
8、將保種管先放于4℃冰箱30min后拿出放置-20℃冰箱過(guò)，次日再放于-80℃的冰箱內3-4天，存放于-196℃的液氮灌內長(cháng)期保存。
更新時(shí)間：2022-08-09
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