說(shuō)說(shuō)關(guān)于細胞外泌體研究的幾個(gè)重要問(wèn)題

　　外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細胞培養上清以及各種體液中，細胞外泌體研究是近些年研究的熱點(diǎn)。

　　

　　細胞外泌體主要原理是根據外泌體的密度、粒徑、沉降系數和親和力等差異進(jìn)行分離，提取方法包括傳統的差速離心、密度梯度離心，以及后來(lái)發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。

　　

　　細胞外泌體研究常見(jiàn)問(wèn)題：

　　

　　1、培養細胞時(shí)，如何避免血清來(lái)源的外泌體污染？

　　

　　細胞培養離不開(kāi)血清，而血清中一般都含有外泌體，為避免血清外泌體的干擾，建議通過(guò)超速離心的方法自制去外泌體血清或者使用商品化的去外泌體血清進(jìn)行細胞培養。

　　

　　2、細胞培養過(guò)程中的死細胞是否會(huì )影響外泌體的提??？

　　

　　會(huì )。細胞凋亡過(guò)程會(huì )釋放大量囊泡，在外泌體的提取純化過(guò)程中會(huì )污染活細胞產(chǎn)生的外泌體。所以在收獲細胞時(shí)，死亡細胞比例最好不要超5%。

　　

　　3、分離細胞上清外泌體需要多少體積？

　　

　　不同細胞系需要的量會(huì )有差異。釋放量較高的細胞系，細胞上清需要幾毫升即可；釋放量低的細胞系則可能需要上百毫升，需要做預實(shí)驗摸索。

　　

　　細胞外泌體研究通常與高通量測序的研究緊密，大致可以分為三大類(lèi)：

　　

　　1、表達譜：特點(diǎn)是短平快，通常以測序數據為主要內容，影響因子3-5；

　　

　　2、分子標志物：特點(diǎn)是在表達譜基礎上加入大量樣本驗證，建立ROC、KM曲線(xiàn)，分析分子與臨床疾病的相關(guān)性為主，文章影響影子3-10；

　　

　　3、分子機制研究：要做到細胞功能、機制研究深度，因此工作量較大，影響因子也較高。