SD大鼠乳鼠心臟微血管內皮細胞原代分離培養方法

1. 將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開(kāi)胸，取出心臟后于含有雙抗的預冷過(guò)的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。

2. 仔細剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內、外膜，PBS清洗。

3. 用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細胞培養皿內，組織塊間隔1-2mm，放入5% CO2，37℃恒溫培養箱內培養。

4. 4小時(shí)后去除培養皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養基，繼續培養。

5. 一般情況下48小時(shí)后可見(jiàn)有細胞爬出，換新鮮培養基繼續培養。

6. 5-7天后有大量細胞鋪滿(mǎn)皿底，棄去培養基，用PBS清洗一遍，加入2ml胰酶進(jìn)行消化1分鐘左右。

7. 吸去胰酶。加入*培養基終止反應，并用移液器反復吹打。

8. 傾斜培養皿稍等片刻，讓組織塊沉淀后吸去上層細胞懸液，70μm細胞篩過(guò)濾后接種至12孔板為后續共培養試驗做準備。