雙熒光素酶報告基因檢測

雙熒光素酶報告基因檢測熒光素（Luciferase）是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統稱(chēng)，其中螢火蟲(chóng)熒光素F-Luciferase和海腎熒光素R-Luciferase具有代表性。研究者利用熒光素酶開(kāi)發(fā)出一套極其靈敏且使用方便的基因報告系統。目前，雙熒光素酶通常是指螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素。這兩種酶的主要區別：1.物種來(lái)源不同；2.它們的底物和輔因子不同；3.發(fā)光的顏色不同。螢火蟲(chóng)螢光素酶是一種胞內蛋白，從甲蟲(chóng)（Photinuspyralis）中分離得到，大小為61KDa。在...

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原代心肌細胞研究要注意些什么？

作為主要的研究模型，原代心肌細胞被廣泛應用于心血管研究。那么我們在研究過(guò)程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細胞在出生后3天內具有部分增殖能力，而成年鼠心肌細胞為終末分化細胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時(shí)間越短，離體心肌細胞存活率越高，越容易貼壁。大量觀(guān)察表明，選擇1～3日齡大鼠分離心肌細胞進(jìn)行原代培養是理想的，尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用，因為難以獲得密度均勻的細胞和控制成纖...

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一文帶你全面了解細胞因子

一文帶你全面了解細胞因子一、細胞因子的概念細胞因子（cytokine，CK），是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的一類(lèi)具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)（多肽或糖蛋白）。細胞因子的發(fā)現歷史1957年，發(fā)現干擾素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名細胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了腫瘤壞死因子（Tumo...

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RNA pull down實(shí)驗技術(shù)

RNApulldown實(shí)驗技術(shù)1.實(shí)驗原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術(shù)。該技術(shù)是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體，洗脫得到RNA結合蛋白質(zhì)。再通過(guò)westernblot實(shí)驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合；或通過(guò)質(zhì)譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此...

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DNA pull down實(shí)驗技術(shù)

DNApulldown實(shí)驗技術(shù)1.實(shí)驗原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標記的DNA片段結合在鏈霉親和素磁珠上，再與細胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Westernblot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結合；做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導下，與已知的幾乎...

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GST pull down實(shí)驗技術(shù)

GSTPulldown實(shí)驗技術(shù)1.實(shí)驗原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標簽（如：GST標簽、His標簽）進(jìn)行融合表達，而帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）融合標簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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常用的細胞凋亡檢測方法【大盤(pán)點(diǎn)】

細胞凋亡人體內的細胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細胞死亡過(guò)程的研究，已成為生物學(xué)、醫學(xué)研究的一個(gè)熱點(diǎn)。已知的細胞死亡方式起碼有兩種，即細胞壞死與細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死是早已被認識到的一種細胞死亡方式，而細胞凋亡則是逐漸被認識的一種細胞死亡方式。此圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò )細胞凋亡是細胞的一種基本生物學(xué)現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著(zhù)必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內環(huán)境的穩定以及多個(gè)系統的發(fā)育中起著(zhù)重要的作用。細胞凋亡不僅...

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【表觀(guān)遺傳】中樞性性早熟研究

中樞性性早熟（CPP）是兒科內分泌的常見(jiàn)疾病，發(fā)病率較高，且逐年增加趨勢明顯。CPP可以導致患者或者家長(cháng)出現社會(huì )、心理問(wèn)題，而且還可能?chē)乐負p害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內分泌醫生密切關(guān)注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，使其提前活化，通過(guò)分泌大量的GnRH，進(jìn)而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發(fā)現，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動(dòng)物中。5-HT由色氨酸代...

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