DNA pull down實(shí)驗技術(shù)

DNA pull down實(shí)驗技術(shù)

1. 實(shí)驗原理

DNA pull down是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標記的DNA 片段結合在鏈霉親和素磁珠上，再與細胞核蛋白孵育，純化出與DNA 片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Western blot檢測特定蛋白是否與靶DNA 片段結合；做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA 片段可能互作的蛋白信息(如：轉錄因子、組蛋白等)。

生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價(jià)作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此用生物素標記核酸后，可以純化出與該核酸結合的各種生物大分子復合物。

2. 實(shí)驗流程

1）探針設計及標記：針對靶標區域設計特異性DNA探針，探針經(jīng)過(guò)脫硫生物素標記，跟偶聯(lián)在磁珠上的鏈霉親和素結合;

2）Pull down：細胞核提取物與磁珠-DNA探針?lè )跤?，靶DNA可以和DNA探針特異性結合，純化出與靶DNA 片段結合的蛋白復合體，經(jīng)過(guò)洗滌可以將非特異性結合蛋白質(zhì)去除；最后，洗脫得到與靶DNA結合的蛋白質(zhì)復合物；

3）互作蛋白質(zhì)鑒定：再經(jīng)過(guò)Western Blot或質(zhì)譜(MS)鑒定蛋白質(zhì)。

3. 技術(shù)服務(wù)

1）DNA探針的設計與合成；

2）細胞培養與核蛋白提??；

3）Pull down捕獲互作蛋白；

4）Western blot驗證；

4）MS鑒定可能的互作蛋白。

4. 交付結果

1）客觀(guān)公正的實(shí)驗原始數據和分析結果；

2）提供詳細、完整的實(shí)驗報告。

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