細胞凋亡檢測的常用檢測方法有這幾種

　　要了解細胞凋亡檢測方法，首先要了解細胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，形態(tài)學(xué)觀(guān)察表明細胞凋亡的變化是多階段的。細胞凋亡往往涉及多個(gè)細胞，甚至少數細胞也異步發(fā)生。首先細胞體積縮小，連接消失，與周?chē)毎蛛x，然后細胞質(zhì)密度增加，隨后會(huì )發(fā)生一系列變化：線(xiàn)粒體膜電位消失；滲透率變化；將細胞c釋放到細胞質(zhì)中；核質(zhì)濃度、核膜和核仁碎裂；DNA被降解成180bp-200bp左右的片段，在細胞膜內形成囊泡；絲氨酸膜表面轉向磷脂膜內側；細胞膜結構仍然完好無(wú)損?？梢詫⒌蛲黾毎臍埡》指畎扇舾蓚€(gè)凋亡小體而不會(huì )溢出。

　　

　　細胞凋亡檢測通常包括形態(tài)學(xué)觀(guān)察、DNA凝膠電泳、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、核小體試驗、流式細胞術(shù)和Westernblot檢測。

　　

　　1、形態(tài)觀(guān)察

　　

　　電鏡觀(guān)察：可見(jiàn)凋亡細胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮和邊緣聚集，常呈新月形，核膜皺縮，細胞質(zhì)致密，細胞器集中，膜泡或“芽”和凋亡小體和凋亡小體被相鄰的吞噬細胞吞噬。

　　

　　2、DNA凝膠電泳

　　

　　細胞凋亡的主要生化特征是染色質(zhì)凝聚。染色質(zhì)DNA在核小體單元之間的連接處斷裂，形成一個(gè)180~200bp的整數寡核苷酸片段。該方法是判斷細胞是否發(fā)生凋亡的簡(jiǎn)單方法，更適用于體外培養的非增殖細胞的檢測。

　　

　　3、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）核小體試驗

　　

　　凋亡細胞的DNA斷裂導致細胞質(zhì)中出現核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片段組成，可通過(guò)ELISA檢測。

　　

　　細胞凋亡檢測步驟：

　　

　?。?）將凋亡細胞裂解并高速離心，上清液中含有核小體；

　　

　?。?）微量定量板上吸附組蛋白；

　　

　?。?）此外，抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合；

　　

　?。?）辛辣過(guò)氧化物酶標記的抗DNA抗體與核小體上的DNA結合；

　　

　?。?）酶加底物，光度吸收值。