對于耐藥細胞株的培養方法你了解多少？

　　耐藥細胞株在長(cháng)期保存和傳代過(guò)程中受到各種不穩定因素的影響，例如，細胞遺傳污染和基因變異。因此，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后，細胞的遺傳物質(zhì)可能發(fā)生變化，導致其生物學(xué)特性發(fā)生變化，從而降低動(dòng)物模型的一致性和可比性。因此，為了保證動(dòng)物模型的穩定性，必須對細胞株的質(zhì)量進(jìn)行監測。那么你對它的培養方法了解多少？

　　所有轉染腫瘤和病毒的細胞都被認為具有潛在的生物危害，必須在二級生物安全平臺上操作，請注意防護。所有與該單元接觸的廢液和容器只能在高壓滅菌后丟棄。收到耐藥細胞株后，用倒置透鏡觀(guān)察整個(gè)細胞的生長(cháng)情況。

 

　　1、若細胞未滿(mǎn)，用75%酒精噴整瓶消毒，放入超級菌臺，嚴格無(wú)菌操作，打開(kāi)細胞培養瓶，吸出培養基，繼續換10ml新鮮培養基后培養。

　　2、如果細胞滿(mǎn)了，可以傳代培養。具體步驟如下：

　?。?）棄去培養基，用PBS（不包括鈣和鎂離子）洗滌1-2次。

　?。?）在培養瓶中加入1ml消化液，倒置在37℃培養箱中預熱1-3分鐘，然后將培養瓶翻轉10-30秒，觀(guān)察倒置顯微鏡下的細胞消化。如果大部分細胞變成圓形，迅速收回控制臺，輕敲幾下培養瓶，然后加入少量*培養基終止消化。

　?。?）按6-8ml/瓶加入*培養基，輕輕打勻，吸出一半，分裝到新的培養瓶中。除非另有說(shuō)明，接受細胞后的繼代培養一般為一到二。

　　耐藥細胞株的培養注意事項：

　　1、細胞在低倍鏡（4倍或5倍物鏡）下觀(guān)察，否則無(wú)法準確判斷細胞的傳代密度。要查看細胞的形態(tài)，請使用10x或20x物鏡。

　　2、瓶?jì)冗\輸介質(zhì)不可重復使用。請使用具有雙抗體的新培養基。細胞冷凍后，培養基不得添加任何抗生素。

　　3、有些細胞沒(méi)有牢固地貼在墻上。如果發(fā)現貼壁細胞脫落，可以離心吹干后接種到新瓶中。