原代心肌細胞間的培養都有哪些抗污染措施？

　　成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁，具有分裂增殖能力。差異貼壁后，原代心肌細胞間中仍有少數成纖維細胞混雜，如果處理不當，很容易長(cháng)成優(yōu)勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂，因此BrdU常規用于抑制成纖維細胞的生長(cháng)。但如果用胎牛血清培養細胞，由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子，BrdU很難抑制成纖維細胞的生長(cháng)。使用小牛血清可以克服這種現象，獲得90%以上的心肌細胞。

　　

　　觀(guān)察原代心肌細胞間形態(tài)時(shí)，接種密度低，貼壁心肌細胞數量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著(zhù)液體的更換而被丟棄，液體的更換應在接種48小時(shí)后進(jìn)行。這不僅會(huì )顯著(zhù)增加貼壁心肌細胞的數量，還會(huì )使BrdU需要更長(cháng)的時(shí)間來(lái)抑制成纖維細胞。另外，其和0.1gL1BSA能為心肌細胞提供營(yíng)養支持，但對心肌細胞的黏附率和凋亡率無(wú)明顯影響。

　　

　　除無(wú)菌操作等常規技術(shù)方法外，還應特別注意以下幾點(diǎn)：獲取心臟時(shí)，避免切開(kāi)消化道。比較安全的方法是切開(kāi)劍突上肋，不涉及腹腔，減少污染機會(huì )。在條件允許的情況下，避免新生大鼠心肌細胞與其他細胞在同一培養箱中共培養，防止交叉污染。培養心肌細胞的觀(guān)察。

　　

　　原代心肌細胞間培養液適宜的pH范圍為7.2~7.4。配制和使用培養基時(shí)，應注意：

　　

　　1、過(guò)濾后pH值會(huì )增加0.1~0.3。

　　

　　2、培養基中加入血清后，pH值會(huì )降低，降低的程度與血清的質(zhì)量和含量有關(guān)。

　　

　　3、及時(shí)更換液體。

　　

　　4、配制好的培養液不宜在4℃下長(cháng)期保存。這是因為培養液中的CO2會(huì )溢出，培養液的pH會(huì )升高。每種配制好的培養液應盡可能在2周內用完，否則應部分保存在-20℃下。使用前要補充谷氨酰胺和碳酸氫鈉，再次過(guò)濾后才能使用。