原代細胞分離與培養

原代細胞(primary cell)是指從生物體獲取細胞直接培養。通常，把培養的第1代細胞與傳10代以?xún)鹊募毎y稱(chēng)為原代細胞培養。由于細胞剛從活體組織分離出來(lái)，因此原代細胞更接近于生物體內的生活狀態(tài)，且生物性狀尚未發(fā)生很大改變。這一方法可為研究生物體細胞的生長(cháng)、代謝、繁殖提供有力的手段，同時(shí)也為以后傳代培養創(chuàng )造條件。

原代細胞的分離與培養

常用的原代細胞培養方法有組織塊培養和分散組織培養。

組織塊培養：是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基后進(jìn)行培養。

組織塊培養法是常用的、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養方法。將組織塊剪切成小塊后，接種于培養瓶，組織小塊貼壁24h或更長(cháng)時(shí)間后，細胞就從組織四周游出。但由于在反復剪切和接種過(guò)程中對組織塊的損傷，并不是每個(gè)小塊都能長(cháng)出細胞。用于組織塊培養的培養瓶可根據不同細胞生長(cháng)的需要作適當處理，如：預先涂以鼠尾膠原薄層，以利于上皮樣細胞等的生長(cháng)。

分散組織培養：是將組織塊從機體中取出離散成單個(gè)細胞，置于合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長(cháng)和繁殖。分散組織培養也是常用的一種原代細胞培養方法，通常用機械法或化學(xué)法將組織塊分散為單細胞。如欲從胎兒或新生兒的組織分離到活性較好的游離細胞，經(jīng)典的方法是用蛋白水解酶(如胰蛋白酶和膠原酶)消化細胞間的結合物，或用金屬離子螯合劑(如EDTA)除去細胞互相粘著(zhù)所依賴(lài)的Ca2+，再經(jīng)機械輕度振蕩，使之成為單細胞。

注意事項：

1. 取材的組織要盡快培養。如若不能及時(shí)培養，可將組織浸泡于培養液內，放置于冰浴或4℃冰箱中，如果組織塊很大，應切成1cm3以下的小塊再低溫保存，但時(shí)間不能超過(guò)24h。

2. 從消化道、周?chē)袎乃澜M織等污染因素存在的區域取材，可用含500～1000u/ml的青-鏈霉素BSS液漂洗5～10min，或用10%達克寧注射液沖洗浸泡10min再作培養。

3. 組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。

4. 原代培養的1～2d內要特別注意觀(guān)察是否有細菌、真菌、霉菌的污染，一旦發(fā)現，要及時(shí)清除。

原代細胞的應用前景

原代細胞在細胞學(xué)研究、遺傳學(xué)研究、腫瘤研究、藥物篩選、細胞移植、類(lèi)器官培養等眾多研究領(lǐng)域備受歡迎，且原代細胞在生物醫藥領(lǐng)域的應用市場(chǎng)前景廣闊。

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